ブックタイトル日本結晶学会誌Vol57No4

概要

日本結晶学会誌Vol57No4

姚閔，中澤祐人SepRSに結合するときに，それぞれのモル数はSepRS：SepCysE（NTD）＝4：4；SepCysSに結合するときに，それぞれのモル数はSepCysS：SepCysE（NTD）＝2：2；SepRSとSepCysSに結合するときに，それぞれのモル数はSepRS：SepCysS：SepCysE（NTD）＝4：4：4となる．次に，Native-PageによってSepCysEのN，C末端ドメインのそれぞれとtRNA Cysとの結合実験を行った（図5）．その結果，SepCysE（NTD）がtRNAと結合しないのに対して，SepCysE（CTD）はtRNAと結合することがわかった．以上の結果は，SepCysEのNTDとCTDがそれぞれ単独で異なる機能を有することを示唆している．つまり，SepCysEのNTDが2個のタンパク質SepRSとSepCysSに結合し，3者複合体を形成する機能をもつのに対して，SepCysEのCTDはtRNA Cysと結合し，アミノアシルCystRNACysを合成する際に，tRNAをSepRSからSepCysSに運ぶ役割を担うと考えられる．5．トランスサルファソームによるCys-tRNA Cysの合成図4ゲルろ過によるタンパク質間の結合実験．（Bindingexperiment between proteins.）（a）SepCysE（CTD）とSepRS，SepCysSの結合実験．（b）SepCysE（NTD）とSepRS，SepCysSの結合実験．SepCysS-SepCysE複合体の構造解析，およびSepCysEの機能解析の結果は，SepRS，SepCysS，SepCycEが3者複合体を形成していることを示唆しており，この複合体が中間体Sep-tRNA Cysを遊離させないようにしてCystRNACysを合成すると考えられる．私たちはこの複合体をtranssulfursome（トランスサルファソーム）と名付けた．さらに，この複合体の形成を検証するため，X線小角散乱（SAXS）実験を用いて，溶液中の3者複合体の形成を調べた．SAXS実験から得られた散乱曲線からシミュレーションした3者複合体のモデルまでは辿り着くことができなかったが，考えられるいくつかのモデル構造から散乱曲線をシミュレーションし，SAXS実験の散乱曲線にフィッティングした結果，図6に示しているような最も一致するモデル（図6の右上）を得た．さらに，これまでに得られた構造，および生化学実験の結果を合わせて，トランスサルファソームによるCys-tRNA Cysの合成の機能を下記のように提案することができた（図7）．まず，SepCysE（NTD）はSepRSとSepCysSを結合することで図5Native-Pageによるタンパク質とtRNA間の結合実験．（tRNA binding experiment of SepCysE（NTD）andSepCysE（CTD）.）左：SepCysE（CTD）とtRNA Cys；右：SepCysE（NTD）とtRNA Cysの結合実験．図6SAXSによる溶液中のトランスサルファソーム構造解析．（SAXS analysis of transsulfursome.）シミュレーション用のモデルはSepRS（緑）とSepCysS（青）-SepCysE（赤）複合体の対称軸を一致させるように作られた．編集部注：カラーの図はオンライン版を参照下さい.248日本結晶学会誌第57巻第4号（2015）